卫计委健康管理师考试辅导：维生素D的测定方法

高效液相色谱法

1. 原理

样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。

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2. 适用范围

本方法来源于GB/T 5413.9-1997。适用于婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定；也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素D含量的测定。

3. 主要仪器

1） 高压液相色谱仪，具有可变波长的紫外检测器，数据处理系统或记录仪。

2） 旋转蒸发器。

3） 平底烧瓶：250mL。

4） 分液漏斗：500mL。

4. 试剂

所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所实验用水均指蒸馏水。

1） 异丙醇：色谱纯。

2） 2％焦性没食子酸乙醇溶液：取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。

3） 75％氢氧化钾溶液：取75g氢氧化钾溶于100mL水中。

4） 石油醚：沸程30～60℃。

5） 甲醇：色谱纯。

6） 正己烷：色谱纯。

7） 环己烷：色谱醇。

8） 维生素D标准溶液

A. 维生素D2标准贮备液：含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

B. 维生素D3的标准贮备液：含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

5. 操作步骤

5.1样品处理：准确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。